辣椒轻斑驳病毒研究现状

3 PMMoV 检测技术的应用情况
目前，常用的植物病毒检测方法包括指示植物法、电子显微镜技术、以外壳蛋白为基础的检测技术和以核酸为基础的检测技术。前2 种方法检测周期较长，不适合田间大量样品的检测，目前生产中常用的检测方法是后2 种，在以外壳蛋白为基础的检测技术中应用最广泛的是酶联免疫技术(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)，以核酸为基础的检测技术中应用广泛的是反转录PCR(ReversetranscriptionPolymerase Chain Reaction，RT-PCR)以及核酸分子杂交技术(Nucleotide molecular hybridization)。
3. 1 ELISA 技术ELISA 是一种采用固相(主要为聚苯乙烯酶联板)吸附，将免疫反应和酶的高效催化反应有机结合在一起的方法，其基本原理是以酶催化的颜色反应指示抗原抗体的结合。ELISA 方法简单、灵敏度高、特异性强、安全、快速且结果容易观察，适于大量样品的检测，目前已被广泛应用于植物病毒检测。ELISA 包括直接法、间接法、双夹心法、竞争法、酶抗酶法、双抗体夹心法6 种，最常用的是双抗体夹心法和间接法。2004 年Ikegashira 等采用DAS-ELISA方法对甜椒地土壤中的PMMoV 进行了检测。2006 年Wang 等采用DAS-ELISA 方法对采自北京、宁夏惠农、河北保定地区的165 个样品进行了PMMoV 检测。2007 年张永江等采用三抗体夹心酶联免疫技术(TAS-ELISA)和RT-PCR 技术对3 份进口包被种衣剂的辣椒种子进行了检测，建立了快速灵敏检测体系。
3. 2 RT-PCR 技术PCR 是1985 年由Saik 等发明的一种体外快速扩增特定基因或DNA 序列的方法，该方法是发展和普及最迅速的分子生物学技术之一。PCR 技术发明后，不断衍生出许多新技术，RT-PCR 就是其中的一种。PMMoV 为RNA 病毒，RT-PCR 可将PMMoV 基因组RNA 中的特异性片段首先利用反转录酶合成cDNA，然后利用PCR 技术对基因进行扩增。PCR 技术的优点是:①灵敏度高;②特异性强(研究表明，其产物的碱基错配率一般只有2 × 10 － 4 );③可用于株系鉴定(同种病毒不同株系间具有免疫交叉反应，血清学方法检测受到限制，但基因组某些区域存在很大差异，所以PCR 可用于株系鉴定);④安全可靠，无放射性危险。2004年黄粤等建立了检测PMMoV 的RT-PCR 技术体系。
3. 3 核酸分子杂交技术该技术是用特定的已知核酸片段与互补核酸序列退火杂交，进而检测核酸样品中特定基因序列的方法。最初的核酸杂交试验采用放射性同位素标记探针，近几年来常采用生物素或地高辛标记的非放射性探针分子(更安全，寿命更长，与放射性标记的探针一样灵敏和实用)。Wang 等利用地高辛标记的cDNA 探针、RT-PCR 以及双抗体夹心ELISA 3 种方法对PMMoV 的检测灵敏度进行了比较，结果表明，RT-PCR 灵敏度最高，地高辛标记的核酸斑点杂交方法灵敏度次之，双抗体夹心ELISA 灵敏度最低。
    目前有关PMMoV 的研究十分有限，主要包括:①确定了PMMoV 的CP 是辣椒植株中L 抗性基因的激发子，并阐明CP 基因中某些核苷酸与激发辣椒中L 抗性密切相关;②PMMoV致弱株系的分离及与致弱相关基因的确定，目前已阐明126 /183 kDa 中的IR 区是主要影响PMMoV 症状表现的区域;③3′端非编码区是PMMoV 的主要致病域。目前，北京附近地区发生的PMMoV-CN 的全基因组序列已为人们所知。进一步研究PMMoV 对防止该病毒的扩散及辣椒病毒病的有效防治具有十分重要的意义。

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